Actividad antimicrobiana in vitro del extracto de hojas de Bixa orellana L. contra bacterias anaerobias asociadas a la vaginosis bacteriana y Lactobacillus spp / In vitro antimicrobial activity of Bixa orellana L. leaves extract against anaerobic bacteria associated to bacterial vaginosis and Lactobacillus spp.

Objetivos . Describir la actividad antimicrobiana in vitro del extracto metanólico de las hojas de Bixa orellana L. contra las bacterias anaerobias asociadas a la vaginosis bacteriana y Lactobacillus spp. Materiales y métodos . Se incluyeron en el estudio ocho cepas de referencia ATCC; Gardnerella vaginalis, Prevotella bivia, Peptococcus niger, Peptostreptococcus anaerobius, Mobiluncus curtisii, Atopobium vaginae, Veillonella parvula y Lactobacillus crispatus, y 22 aislamientos clínicos; once aislados de Gardnerella vaginalis y once aislados de Lactobacillus. La susceptibilidad antimicrobiana se determinó mediante el método de difusión en agar. La concentración mínima inhibitoria (CMI) y la concentración bactericida mínima (CBM) fueron determinadas utilizando el método de dilución en agar y un método de dilución modificado, respectivamente. Resultados . Todas las cepas de referencia ATCC tuvieron un alto nivel de susceptibilidad al extracto, con excepción de P. vibia, V. parvula y L. crispatus. Interesantemente, los aislamientos clínicos de G. vaginalis y la cepa ATCC de G. vaginalis fueron los más susceptibles al extracto dados los bajos valores de CMI (1,0 - 2,0 mg/mL) y CBM (1,0 - 4,0 mg/mL), mientras que, los aislamientos clínicos de Lactobacillus spp. y la cepa ATCC de L. crispatus fueron los menos susceptibles debido a los altos valores de CMI (32,0 mg/mL) y CBM (≥ 32,0 mg/mL). Conclusiones . Los experimentos in vitro sugieren que el extracto posee propiedades antibacterianas selectivas dada su alta actividad contra bacterias anaerobias asociadas a vaginosis bacteriana y baja actividad contra especies de Lactobacillus.

Objective. To describe the in vitro antimicrobial activity of the methanolic extract of Bixa orellana L. leaves against anaerobic bacteria associated to bacterial vaginosis and Lactobacillus spp. Materials and methods. Eight ATCC reference strains; Gardnerella vaginalis, Prevotella bivia, Peptococcus niger, Peptostreptococcus anaerobius, Mobiluncus curtisii, Atopobium vaginae, Veillonella parvula, and Lactobacillus crispatus, and twenty-two clinical isolates; eleven Gardnerella vaginalis and eleven Lactobacillus strains, were included in the study. The antimicrobial susceptibility was determined by the agar diffusion method. The minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) were determined by using agar dilution and a modified dilution plating method, respectively. Results. All ATCC reference strains showed high levels of susceptibility to the extract, except P. vibia, V. parvula and L. crispatus. Interestingly, all G. vaginalis clinical isolates and the G. vaginalis ATTC strain were the most susceptible to the extract, given their low MIC (1.0 - 2.0 mg/mL) and MBC (1.0 - 4.0 mg/mL) values, whereas, the Lactobacillus spp. clinical isolates and the L. crispatus ATCC strain were the least susceptible bacteria given their high MIC (32.0 mg/mL) and MBC (≥ 32.0 mg/mL) values. Conclusions. In vitro experiments suggest that the extract possesses selective antimicrobial properties given its high activity against bacterial vaginosis-associated anaerobic bacteria and low activity against Lactobacillus species.

Frecuencia de resistencia a la colistina en Pseudomonas aeruginosa: primer reporte en el Perú

El objetivo del estudio fue determinar la frecuencia de resistencia a la colistina en Pseudomonas aeruginosa provenientes de tres establecimientos de salud de Lima, criopreservados en el banco de cepas del Laboratorio de Resistencia a Antimicrobianos e Inmunopatología de la Universidad Peruana Cayetano Heredia (UPCH). El método de elución de discos de colistina en caldo fue empleado para la identificación fenotípica de la resistencia a la colistina; la detección de la expresión del gen mcr-1 se realizó mediante el método fenotípico de difusión de discos combinados de colistina y ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) y la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la identificación molecular del gen. De los 97 aislados estudiados, 7 (7,2%) fueron resistentes a la colistina y ninguno fue portador del gen mcr-1. Este estudio constituye el primer reporte en el Perú de aislados clínicos de Pseudomonas aeruginosa resistentes a la colistina, lo que implica la necesidad de implementar metodologías apropiadas para la vigilancia epidemiológica de patógenos resistentes a la colistina.

This study aimed to determine the frequency of colistin resistance in Pseudomonas aeruginosa isolates obtained from three healthcare facilities in Lima and cryopreserved at the Laboratorio de Resistencia Antimicrobianos e Inmunopatología of the Universidad Peruana Cayetano Heredia (UPCH). The colistin broth disk elution method was used for the phenotypic identification of colistin resistance. We detected the expression of the mcr-1 gene by using the phenotypic diffusion method with combined colistin and ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) disks; and polymerase chain reaction (PCR) was used for molecular identification of the gene. Of the 97 isolates, 7 (7.2%) were resistant to colistin; however, none carried the mcr-1 gene. This is the first report from Peru on clinical isolates of colistin-resistant Pseudomonas aeruginosa, which suggests the need for implementation of appropriate methodologies for the epidemiological surveillance of colistin-resistant pathogens.

Caracterización fenotípica y molecular de Escherichia coli productoras de Beta-Lactamasas de espectro extendido en pacientes ambulatorios de Lima, Perú / Phenotypic and molecular characterization of extended spectrum beta-lactamase producing strains of Escherichia coli in ambulatory patients in Lima, Peru

Objetivos: Determinar las características fenotípicas y genotípicas de las β-lactamasas de espectro extendido (BLEE) en E. coli aislados de cultivos de orina de pacientes de la comunidad en un laboratorio privado de la ciudad de Lima, Perú. Material y métodos: Se evaluaron 53 aislamientos de E. coli por dos métodos fenotípicos: Jarlier y CLSI, el perfil de susceptibilidad se realizó mediante disco difusión y la caracterización genotípica mediante PCR para los genes blaCTX-M, blaTEM y blaSHV. Resultados: Los 53 aislamientos productores de BLEE representaron el 16,30% del total de aislados de E. coli, afectando principalmente a mujeres mayores de 65 años. El perfil de susceptibilidad evidenció alta resistencia a AMP,CEF,CRO(100%), LEV(87%), NOR(92%), CIP y NAL(94%), CXM y CTX(96%),SXT(70%), ATM(75%) y TOB (85%); asimismo elevada sensibilidad a NIT e IPM(100%), AMK(91%) y FOF(73,6%). El tipo de gen bla más frecuente fue blaCTX-M (55%), seguido por la coexistencia blaCTX-M+TEM (24%), blaTEM (13%) y blaSHV (6%). Conclusiones: La frecuencia de E. coli productores de BLEE fue de 16,3%; siendo el gen tipo blaCTX-M el más frecuente, información valiosa para orientar la terapia antimicrobiana empírica.

Objective: To determine the phenotypic and genotypic features of extended spectrum beta-lactamase (ESBL) producing strains of Escherichia coli isolated from urine samples of patients attending outpatient services in a private laboratory in Lima, Peru. Methods: 53 E. coli isolates were evaluated using two phenotypic methods: Jarlier and CLSI, the susceptibility profile was performed using the disk diffusion method and the genotypic features were analyzed using PCR for detecting blaCTX-M, blaTEM y blaSHV genes. Results: The 53 ESBL producing strains of E. coli accounted for 16,30% of all E. coli isolates affecting mostly women older than 65 years. High resistant profile to AMP, CEF, CRO (100%), LEV (87%), NOR (92%), CIP, NAL (94%), CXM, CTX (96%), SXT (70%), ATM (75%) and TOB (85%) was observed. High susceptibility to NIT, IPM (100%), AMK (91%) and FOF (73.6%) was observed. The most frequent bla gen was blaCTX-M (55%), followed by blaCTX-M+TEM (24%), blaTEM (13%) and blaSHV (6%). Conclusions: The rate of ESBL producing strains of E. coli was 16.3% and the blaCTX-M gen was the most common gene type. These results provide valuable information for starting empiric antibiotic therapy in this setting.

Serotipos y susceptibilidad antimicrobiana de Shigella aisladas en un instituto de salud pediátrico de Lima, Perú entre enero y julio 2013 / Serotypes and antimicrobial susceptibility of Shigella isolated in Pediatric Health Institute in Lima, Peru from January to July 2013

Objetivos: Determinar la frecuencia de serogrupos y serotipos y el perfil de susceptibilidad antimicrobiana de Shigella sp., aisladas en un instituto pediátrico de Lima, Perú. Material y métodos: Se evaluaron 85 aislamientos de Shigella sp., identificados bioquímicamente y serológicamente a nivel de serogrupo y serotipo por el método de aglutinación en lámina. Los patrones de resistencia antibiótica se determinaron mediante el método de disco difusión en agar. Resultados: De los 85 aislamientos de Shigella sp., 53 (62,3%) correspondieron al serogrupo B (Shigella flexneri), 28 (32,9%) al grupo D (Shigella sonnei) y 4 (4,8%) al grupo C (Shigella boydii), ningún aislamiento correspondió al grupo A (Shigella dysenteriae). Respecto a los serotipos, en el grupo B, fueron 46% 1b, 36% 2a y 18% variante Y; en el grupo C fue C4 y en el grupo D todos fueron Fase I. La evaluación del perfil de susceptibilidad mostró que el 100% de las cepas fueron sensibles a aztreonam, ácido nalidíxico y ciprofloxacina; entre 80 y 90% fueron resistentes a trimetoprim-sulfametoxazol, ampicilina y tetraciclina. Conclusiones: El serogrupo más frecuente fue Shigella flexneri, no se reportó Shigella dysenteriae. Existe elevado nivel de resistencia a Sulfametoxazole/trimetoprim, ampicilina y tetraciclina. (AU)

Objectives: To determine the frequency of serogroups and serotypes and antimicrobial susceptibility profile of Shigella sp., isolated in a pediatric institute from Lima, Peru. Methods: Observational study conducted in 85 isolates of Shigella sp., serologically identified to serogroup and serotype by slide agglutination method. The antibiotic resistance patterns were determined by disk diffusion in agar. Results: 53 (62.3%) were serogroup B (Shigella flexneri), 28 (32.9%) group D (Shigella sonnei) and 4 (4.8%) group C (Shigella boydii) , no bacteria group A (Shigella dysenteriae) was isolated. Respect to serotypes, in group B were 46% 1b, 36% 2a y 18% Y variant; in group C was C4 and in group D all were phase I. Evaluation of susceptibility profile showed that 100% of the strains were susceptible to aztreonam, nalidixic acid and ciprofloxacin; between 80 and 90% were resistant to trimethoprim-sulfamethoxazole, ampicillin and tetracycline. Conclusions: The most common serogroup was Shigella flexneri. Shigella dysenteriae was not reported. There is a high level of resistance sulfamethoxazole / trimethoprim, ampicillin and tetracycline. (AU)

Fagoterapia frente a infecciones por Staphylococcus aureus meticilino resistente en ratones / Phagotherapy faced with Staphylococcus aureus methicilin resistant infections in mice

Objetivos: Evaluar la actividad de los bacteriófagos frente a infecciones localizadas y sistémicas producidas por Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA) Materiales y métodos. Se realizó un estudio de tipo experimental en 45 ratones de la cepa Balb/c divididos en nueve grupos de cinco individuos. Se aislaron diez bacteriófagos nativos a partir de muestras clínicas y efluentes hospitalarios, se evaluó su capacidad lítica y su espectro de actividad, en base a lo cual se seleccionaron seis fagos para los ensayos de fagoterapia. Adicionalmente, se empleó un bacteriófago de origen comercial. La fagoterapia fue evaluada mediante profilaxis y terapia de infecciones localizadas y sistémicas causadas por la inoculación de MRSA por vía subcutánea y endovenosa respectivamente. Se probó la efectividad de tres esquemas terapéuticos: monoterapia, cóctel de fagos en múltiples dosis y de cóctel de fagos en una sola dosis. También se comparó la actividad terapéutica de los fagos frente a vancomicina y clindamicina. Resultados. El cóctel de fagos y la terapia a diversas dosis fueron efectivos para prevenir y controlar infecciones localizadas por MRSA, su actividad fue similar a la de vancomicina y clindamicina. La dosis única del cóctel de fagos no logró controlar la infección localizada; asimismo, la fagoterapia no resultó efectiva en infecciones sistémicas. Conclusiones. La fagoterapia se proyecta como una alternativa viable frente a infecciones causadas por MRSA. Se requieren estudios que evalúen aspectos relacionados con la inocuidad de los fagos frente al paciente.

Objectives: To assess the bacteriophage activity in localized and systemic infections caused by Staphylococcus aureus resistant to methicilin (MRSA). Materials and methods. An experimental study was performed in 45 mice of the Balb/c strain divided in nine groups of five individuals. Ten naive bacteriophages were isolated through clinical samples and hospital effluents. Lytic capacity and spectrum activity was evaluated on the basis of which six phages were selected for phagotherapy trials. Additionally, a commercial bacteriophage was used. The phagotherapy was evaluated through prophylaxis, and therapy of localized and systemic infections caused by MRSA by subcutaneous and intravenous inoculation, respectively. The effectiveness of three therapeutic schemes was tested: monotherapy, phage cocktail in multiple doses and phage cocktail in a single dose. The therapeutic activity of the phages was also compared with vancomycin and clindamycin. Results. The phage cocktail and the diverse dose therapy were effective in preventing and controlling MRSA localized infections; its activity was similar to the vancomycin and clindamycin activity. The single dose phage cocktail failed to control localized infection and phagotherapy was not effective in systemic infections. Conclusions. Phagotherapy could be a viable alternative for infections caused by MRSA. Further studies that assess related aspects to phages and patient safety are required.

Comparación de cuatro métodos fenotípicos para la detección de beta-lactamasas de espectro extendido / Comparison of four phenotypic methods to detect extended-spectrum betalactamases

Objetivo. Comparar la eficacia de cuatro métodos fenotípicos para la identificación de cepas productoras de lactamasas de espectro extendido aisladas de urocultivos. Materiales y métodos. Estudio comparativo de corte transversal. Se analizó 147 cepas aisladas de urocultivos positivos para Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae y Proteus mirabilis entre los meses de enero y febrero de 2009 en el Instituto Nacional de Salud del Nino, las cuales fueron sometidas a una prueba de tamizaje, en aquellas que resultaron positivas se realizo pruebas confirmatorias mediante los cuatro métodos fenotípicos evaluados. Resultados. De las 147 cepas, 43 (29,3 por ciento) resultaron sospechosas en las pruebas de tamizaje. Con el método descrito por Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) usado como patron de oro para el estudio, resultaron 27 positivas (62,8 por ciento), resultado similar a lo encontrado con el método de Jarlier. Por otro lado, con los métodos de Hodge y el tridimensional, 23 (53,5 por ciento) resultaron positivas. La evaluación de los métodos confirmatorios frente al descrito por CLSI, mostro una sensibilidad y especificidad de 100 por ciento para el método de Jarlier; en el caso de los métodos de Hodge y método tridimensional se encontró una sensibilidad y especificidad de 85,2 por ciento y 100 por ciento, respectivamente. Conclusiones. Los métodos evaluados mostraron en todos los casos una alta eficacia, sin presentar diferencias significativas, por lo que podrían utilizarse según las facilidades del laboratorio clínico involucrado; sin embargo dada las ventajas no técnicas, como costos, facilidad y factibilidad de su aplicación, se recomienda el empleo del método de Jarlier.

Objective. To compare the efficacy of four phenotypic methods for the identification of strains producing extended-spectrum Beta-lactamases isolated from urine cultures. Materials and methods. Comparative cross-sectional study. 147 strains isolated from positive urine cultures for Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae and Proteus mirabilis between January and February 2009 in the National Institute of Health of Children underwent a screening test, those which resulted positive were processed for confirmatory testing through the four phenotypic methods evaluated. Results. Out of the 147 strains, 43 (29.3 percent) were suspicious in the screening tests. Using the method described by the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) as a reference standard for this study, 27 strains (62.8 percent) were positive, with similar results using Jarlier's method. On the other hand, using Hodge's and tridimensional methods 23 (53.5 percent) of samples were positive. The evaluation of the confirmation methods in comparison to the one described by CLSI, showed a sensitivity and specificity of 100 percent for Jarlier's method, on the other hand, for Hodge's and tridimensional methods we found a sensitivity of 85.2 percent and 100 percent, respectively. Conclusions. All the evaluated methods showed a high efficacy, without significant differences, so they could all be used according to the available facilities of each clinical laboratory. Nevertheless, due to its advantages besides the technical aspect, like costs, easiness and feasibility of its application, we recommend the use of Jarlier's method.

Staphylococcus aureus resistente a meticilina adquirido en la comunidad aislados en tres hospitales de Lima-Perú / Methicillin resistant Staphylococcus aureus isolates acquired in the community in three hospitals in Lima, Peru

Staphylococcus aureus es un importante patógeno involucrado en una serie de infecciones e intoxicaciones, presenta múltiples factores de virulencia y su impacto se incrementa por su notable resistencia a los antimicrobianos. Objetivo: Determinar la frecuencia de Staphylococcus aureus meticilino resistente adquiridos en la comunidad, en hospitales de Lima- Perú. Material y métodos: Se realizó un estudio descriptivo multicéntrico. La resistencia a meticilina se determinó por el método Oxacillin Agar Screen. El origen de la cepa fue determinado mediante los criterios de los CDC; la Leucocidina de Panton Valentine fue identificada por métodos moleculares. Resultados: Se aislaron 276 cepas de Staphylococcus aureus, 160 fueron resistentes a meticilina (58 por ciento), 9 de ellas fueron identificadas como adquiridas en la comunidad (5,6 por ciento). La PVL fue identificada en 25 cepas (9,1 por ciento), 14 fueron MSSA y 11 MRSA, de éstas últimas solo 4 fueron MRSAcom, 7 fueron MRSAhosp (p menor que 0,001). Conclusiones: El estudio revela niveles elevados de resistencia a meticilina, pero niveles bajos de MRSAcom. En nuestro medio la presencia de PVL no constituiría un marcador para la identificación de los MRSAcom.

Background: Staphylococcus aureus is an important pathogen involved in a series of infections and toxin mediated syndromes, has many virulence factors and its impact increases its resistance to antimicrobial agents. Objectives: To determine the frequency of community acquired methicillin resistant Staphylococcus aureus among hospitals in Lima -Peru. Material and Methods: We performed a prospective multicenter study. The resistance to methicillin was determined by the Oxacillin Agar Screen method. The origin of the strain was determined using CDC criteria, the Panton Valentine Leucocidin was identified by molecular methods. Results: We isolated 276 strains of Staphylococcus aureus, 160 were resistant to methicillin (58 per cent). 9 strains were identified as community acquired MRSA (5.6 per cent). The Panton Valentine Leucocidin was identified in 25 strains (9.1 per cent), 14 were MSSA and 11 MRSA, only 4 of the latter were CA MRSA, 7 were HA MRSA (p less than 0.001). Conclusions: The study showed frequencys of methicillin resistance, but low CA MRSA. In our environment the presence of PVL would not be a marker for the identification of CA MRSA.